Апокринная карцинома молочной железы: иммуногистохимические особенности, маркеры, цитогенетические характеристики. Часть 2

Гистология апокринной карциномы молочной железы достаточно хорошо изучена.

Ультраструктурно апокринные клетки имеют богатую цитоплазму с четко очерченными контурами. Их цитоплазма содержит электронно-плотные мембранные гранулы, пустые пузырьки, выступающий аппарат Гольджи и большие митохондрии с неполными кристами.

Морфологические критерии апокринной карциномы молочной железы

Сильно варьирующая частота встречаемости данной патологии (0,3-4%) подтверждает необходимость стандартизированных критериев диагностики апокринной карциномы.

В 2005 году предложены следующие морфологические критерии: 

1. апокринные признаки, которые имеют минимум 75% клеток; 
2. большие клетки с эозинофильной гранулярной цитоплазмой;
3. соотношение ядра и цитоплазмы 1:2 или более;
4. ядро ​​большое, округлое и везикулярное может быть плеоморфным;
5. четко очерченные границы. 

Незначительные и необязательные критерии включают выступающие ядрышки в>50% полей и апикальные цитоплазматические выпячивания в просветные пространства. 

Различают два типа апокринных клеток:

• Клетки типа A: обильная гранулярная и сильно эозинофильная цитоплазма, гранулы устойчивы к PAS + диастазе, ядра варьируют от глобоидных с выраженными ядрышками до гиперхроматических. Более распространены.
• Клетки типа В: обильная цитоплазма с мелкими пустыми вакуолями, создающими пенистый вид, напоминающий гистиоциты, ядра похожи на клетки типа А. Менее распространены.

Иммуногистохимические особенности инвазивной апокринной карциномы молочной железы

Инвазивные апокринные карциномы демонстрируют цитологические и иммуногистохимические особенности апокринных клеток, которые характеризуются обильной гранулярной эозинофильной цитоплазмой более чем в 90% опухолевых клеток. Цитоплазматические гранулы окрашиваются периодической кислотой-Шиффом и сохраняют положительное окрашивание после переваривания диастазой. Апокринные клетки обычно окрашиваются жидким белком-15 (GCDFP15).

Жидкий белок 15 (GCDFP-15) – маркер апокринной дифференцировки выражен в большинстве случаев, но не требуется для морфологической диагностики апокринной карциномы.

Апокринные клетки также экспрессируют рецепторы андрогенов и обычно не экспрессируют рецепторы эстрогенов и прогестерона.

Положительные реакции:

• кератин, GCDFP-15 (76%-100%), В72.3 (92%), PAS (гранулы);
• ER-бета (73%), особенно ER-бета1;
• AR рецепторы андрогенов (более 80-90%);
• HER2 (33%), p53 (29%-39%), Ki67.

Необходимо обратить внимание, что экспрессия GCDFP-15 и AR снижается в более крупных опухолях или опухолях с положительными лимфатическими узлами.

Отрицательные реакции:

• ER-альфа (обычно);
• PR (обычно) bcI2.

Маркер апокринной дифференцировки – андрогенный рецептор (AR)

Андрогенный рецептор (AR) является членом семейства стероидных рецепторов. Это один полипептид с разными доменами, которые обеспечивают разные функции. Его активность связана с развитием и прогрессированием рака груди. AR оказывает антиэстрогенное действие, подавляющее рост, при нормальных тканях груди и ER-положительных карциномах груди. Однако в ER-негативных карциномах молочной железы, включая инвазивную апокринную карциному, он оказывает противоположный эффект, способствуя росту клеток и развитию опухоли. 

Фактор транскрипции FoxA1, по-видимому, является ключевым медиатором передачи сигналов AR при раке груди, включая апокринную карциному груди. Ученые также обнаружили значительную функциональную перекрестную связь между AR и HER-2, которая включает активность FoxA1, а также путь передачи сигналов внеклеточной киназы, регулируемой сигналом (ERK). Более того, показано, что пролактин-индуцированный белок (PIP) (или GCDFP-15) является наиболее активно регулируемым геном петли обратной связи AR/ERK в апокринных опухолевых клетках. 

Экспрессия AR наблюдается до 80 и более карцином груди, включая ER-/PR- карциномы груди. Процент экспрессии AR у некоторых подтипов выше, чем у ER и PR (до 90% при инвазивных карциномах протоков низкой степени). Из-за его постоянной сверхэкспрессии, в апокринном эпителии AR был обозначен как маркер апокринной дифференцировки. AR связан с передачей сигналов HER-2/neu при раке груди, включая особые типы, такие как болезнь Педжета и апокринная карцинома. 

Мутации гена AR не были описаны в образцах ткани карциномы груди, но мутация гена AR недавно была описана в апокринной клеточной линии MDA-MB-453. Описанные микросателлитные полиморфизмы гена AR и потеря активных генов могут вносить вклад в статус белка AR в карциномах груди у женщин с потенциальными последствиями для инициации и прогрессирования опухоли. Таким образом, иммуногистохимическое обнаружение AR может коррелировать с повторами CAG на гене AR с большим количеством повторов, связанных с более высокой экспрессией AR. 

При раке молочной железы предполагалось, что изменения в гене AR инициируют развитие опухоли, но мутации, по-видимому, чрезвычайно редки. 

Маркер апокринной дифференцировки – GCDFP-15

Жидкий протеин 15 (GCDFP). -15), идентифицированный Haagensen et al. в 1977 году представляет собой 15-кДапротеин, картированный на хромосоме 7. GCDFP-15 действует как анаспартил протеаза с фибронектином в качестве субстрата. Его экспрессия связана с апокринной дифференцировкой, включая апокринную карциному.

Несмотря на то, что его положительный эффект был подтвержден при других подтипах карциномы груди, экспрессия протеина GCDFP-15, по-видимому, снижается в запущенных (стадия и больший размер) апокринных карциномах. Это заставляет некоторых авторов ставить под сомнение GCDFP-15 как определенный маркер апокринной карциномы. 

Аналогичным образом, исследование Cimino-Mathews et al. продемонстрировали постепенную потерю экспрессии AR во время прогрессирования апокринного рака молочной железы от первоначального диагноза до конечной стадии метастазов (Cimino-Mathews et al., 2012). 

Проведены обширные протеомные исследования апокринных карцином, определив специфическую сигнатуру апокринного белка, аналогичную сигнатуре апокринных потовых желез. Сигнатура включает маркеры, которые постоянно экспрессируются (AR, CD24, 15-PDGH [простагландиндегидрогеназа], ACMS1 [член семейства 1 цепи средней цепи ацил-СоА-синтетазы]) и маркеры, которые не экспрессируются (ER-альфа, PR, Bcl-2, GATA- 3). Было показано, что для апокринных карцином характерно повышенная регуляция нескольких дополнительных белков (маркеров), включая псориазин, S100A9, p53, гидроксиметилглутарил-кофермент A-редуктазу (HMG-CoA-редуктазу) и циклооксигеназу-2 (COX-2). 

5альфа-редуктаза – это фермент, который превращает тестостерон в мощный андроген дигидротестостерон (ДГТ). Его экспрессия наблюдалась примерно в 60% апокринных карцином и коррелировала с неблагоприятными параметрами, включая ангиолимпатическую инвазию, более высокую гистологическую степень и плохой клинический исход. 

Другие специфичные маркеры апокринной дифференцировки

Другие специфичные маркеры, которые были предложены как именно специфичные для апокринной дифференцировки, включают гамма-глутамилтрансферазу 1 (GGT-1) и ассоциированный с опухолью гликопротеин-72, гликопротеин с высокой молекулярной массой, который, по-видимому, является более чувствительный маркер апокринной дифференцировки, чем GCDFP-15. 

Эпителиальные маркеры

Апокринные карциномы сохраняют реактивность в отношении эпителиальных маркеров с использованием иммуногистохимических анализов, включая цитокератины широкого спектра [CK] (например, AE1-AE3), люминальные цитокератины, включая CK7, CK8, CK18 и CK19, и EMA. А также СК 20 (в отличие от большинства других подтипов карциномы молочной железы, положительность CK20 также описана в карциномах молочной железы с апокринной дифференцировкой).

Экспрессия базальных цитокератинов (например, СК5, СК5 / 6, СК14) несколько противоречива. Экспрессия других базальных/миоэпителиальных маркеров [например, p63, P-кадгерин, мРНК-связывающий белок 3 инсулиноподобного фактора роста-II (IMP3)], возможно, встречается только спорадически. А вот белок S-100 , CD10 (Неприлизин), c-Kit (CD117), CD109 и Виментин имеют тенденцию быть отрицательными при большинстве апокринных карцином. 

Статус рецептора 1 инсулиноподобного фактора роста (IGF-1R) IGF-1R представляет собой трансмембранный рецептор с тирозинкиназной активностью, активация которого связана с устойчивостью к трастузумабу (Lu et al., 2001). IGF-1R, значительно подавляется при апокринных поражениях груди, включая апокринную карциному груди при других ER-отрицательных карциномах молочной железы (Bhargava et al., 2011). 

Нейроэндокринные маркеры

Апокринные карциномы обычно отрицательны по нейроэндокринным маркерам (например, синаптофизину, CD56-A). А вот, нейроэндокринные карциномы могут экспрессировать апокринные маркеры (GCDFP-15) в 50% случаев. 

Маркеры стволовых клеток

Маркеры стволовых клеток CD44+ / CD24- /низкий иммунофенотип наряду с положительностью альдегиддегидрогеназы 1 (ALDH-1) связаны с характеристикой стволовых клеток опухолевых клеток рака молочной железы. Эти маркеры описаны при инвазивной карциноме протоковой неспецифического типа (NST), а также при некоторых специфических типах, включая медуллярную и метапластическую карциному груди. Что касается апокринных карцином, они, не обогащены этим иммунофенотипом. 

Цитогенетические характеристики апокринной карциномы 

Очень немногие исследования специально посвящены цитогенетическим особенностям апокринной карциномы. Большинство этих исследований включало ограниченное количество случаев с противоречивыми результатами. В отличие от некоторых других особых типов (например, аденоидно-кистозная карцинома, секреторная карцинома), характерные транслокации, специфичные для апокринной карциномы, еще не описаны. 

Исследования. показали, что апокринная протоковая DCIS и инвазивная апокринная карцинома часто демонстрируют увеличение 1q, 2q, 1p и потерю 1p, 22q, 17q, 12q и 16q как наиболее распространенные хромосомные изменения. 

Другое исследование, основанное на трех апокринных карциномах, изученных с помощью стандартной цитогенетики и анализа однонуклеотидного полиморфизма (SNP), выявило сложные цитогенетические изменения в апокринных карциномах с последовательным увеличением хромосом 7 и 17. Обычный цитогенетический анализ клеточной линии MDA-MB-453 выявил гипертриплоидный клон, характеризующийся обширными числовыми и структурными аномалиями, которые включают увеличение количества хромосом 7, 11, 17, 19 и 21 и потери хромосом X, 3, 4, 9, 13, 14, 16 и 18. 

Особый интерес представляет полисомия CEP17 без амплификации гена HER-2/neu (определяемая как отношение HER2 к CEP17>2,2), которая является обычным явлением при апокринной карциноме и может быть связана со сверхэкспрессией белка Her-2 / neu, когда абсолютное число копий гена HER2 превышало 6 на ядро. 

Другое исследование обнаружило потерю гетерозиготности в хромосомах 1p35-36 (NB), 3p25 (VHL), 16p13 (TSC2 / PKD1) и 17p13 ( TP53) при микродиссектированных апокринных карциномах молочной железы. 

Примечательно, что в нескольких исследованиях была обнаружена мутация гена TP53 (с последующей сверхэкспрессией белка p53), обычно присутствующая при апокринной карциноме и связанная со сверхэкспрессией Her-2/neu. И это несмотря на то, что сообщается о более высокой экспрессии белка p53 при тройно-отрицательных апокринных карциномах по сравнению с положительными по HER-2/neu. 

Недавнее исследование 2013 года подтвердило высокую частоту мутаций гена TP53 в «молекулярных апокринных опухолях». Также при апокринной DCIS в отличие от доброкачественных апокринных поражений наблюдалась экспрессия белка p53.

Продолжение статьи

• Часть 1. Апокринная карцинома молочной железы: характеристика, классификация.
• Часть 2. Апокринная карцинома молочной железы: иммуногистохимические особенности, маркеры, цитогенетические характеристики.
• Часть 3. Апокринная карцинома молочной железы: молекулярные особенности, симптомы, диагностика, лечение, прогноз.