Статус HER2 при диагностике опухолей молочных желез. Иммуногистохимическое тестирование. Тесты ISH. Часть 2

Иммуногистохимия, представляет собой специальный процесс окрашивания, выполняемый на свежей или замороженной ткани рака молочной железы, удаленной во время биопсии. Этот анализ оценивает экспрессию белка HER2 в клеточных мембранах, то есть используется для того, чтобы показать, есть ли у раковых клеток рецепторы HER2/neu. 

Иммуногистохимическое тестирование Her2/neu

Классификация анализов IHC основана на системе баллов 0, 1+, 2+ и 3+.

• Если оценка равна от 0 до 1+, то она называется “HER2 отрицательная”. Окрашивание отсутствует. 
• Если оценка равна 2+, то она называется “пограничной”. Образцы, показывающие слабое или умеренное окрашивание в >10% опухолевых клеток оцениваются как 2+. Результат считается двусмысленным и требует подтверждения статуса HER2 альтернативным методом, как правило, FISH.
• Оценка 3+ называется “HER2 положительный результат.” Согласно результатам ИГХ-анализов, образцы опухолей, демонстрирующие сильное полное окрашивание мембран в >10% опухолевых клеток, классифицируются как 3+ на ИГХ и представляют собой однозначный положительный результат в соответствии с критериями приемлемости для основных (трастузумаба) таргетных препаратов.

Плюсы ИГХ тестирования:

• проводится сравнительно быстро; 
• результаты можно увидеть с помощью обычного яркопольного микроскопа;
• окрашенные ткани со временем не деградируют;
• кроме того, тестирование IHC позволяет параллельно просматривать морфологические особенности опухолевых клеток.

Тесты ISH

Первоначально FDA (США, управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов) одобрило анализы HER2 FISH для идентификации женщин с узловой негативной формой рака с высоким риском рецидива/смерти, связанной с болезнью, или для отбора к химиотерапии доксорубицином. Однако эта полезность была расширена в 2001 году, когда HER2 FISH PathVysion® Kit (Abbott Molecular, Des Plaines, IL) получил одобрение в качестве вспомогательного средства при оценке пациентов, для которых рассматривалось лечение трастузумабом. 

Определение статуса HER2 FISH проводится на образцах фиксированных парафином. Он показывает среднее число копий HER2 с использованием ДНК-зонда, гибридизирующегося с геном HER2 отдельно или в ассоциации с центромерным зондом в качестве контроля для числа копий хромосомы 17, выраженного в соотношении HER2/CEN17.

Соотношение HER2/CEN17 получают путем деления среднего числа сигналов HER2 на среднее число сигналов CEN17 в опухолевых клетках и определяют: 

• положительную амплификацию гена HER2 if >2.2;
• двусмысленную if между 1.8 и 2.2;
• отсутствие амплификации HER2 if ><1.8, согласно рекомендациям ASCO/CAPs 

В соответствии с критериями приемлемости для основных адъювантных испытаний трастузумаба, FISH-положительный результат определяется как отношение HER2/CEP17 ≈ 2,0. 

При измерении молекулярная характеристика статуса HER2 FISH является более точной, воспроизводимой и надежной, чем ИГХ. 

Однако, эта методика технически более требовательна, в значительной степени незнакома патологам при проведении HER2-тестирования. Получается, что FISH также имеет недостатки. Высокая стоимость становится основным предметом рассмотрения, потому что для выполнения этого анализа требуется флуоресцентный микроскоп, темная комната и сертифицированный патологоанатом, который может определить разницу между синими ядрами раковых клеток в образце и синими ядрами доброкачественных реактивных клеток.

Следует отметить, что потенциально более высокая точность FISH относительно иммуногистохимии не означает, что пациент, тестирующий положительный результат на ИГХ, но отрицательный на FISH, не должен считаться непригодным для HER2-специфической терапии. Каждый тест обнаруживает определенный клеточный признак (повышенный уровень белка по сравнению с амплифицированными последовательностями ДНК) и потенциально может выявить HER2-положительные случаи, которые упускаются из виду другими.

Новые технологии для тестирования HER2 включают хромогенную гибридизацию in situ CISH и усиленную серебром гибридизацию in situ (SISH). CISH использует Меченый ферментом пероксидазой зонд для хромогенного обнаружения диаминобензидином. SISH использует ту же систему с системой обнаружения на основе серебра. Поскольку эти процессы не включают флуоресцентный краситель, можно использовать стандартный микроскоп с ярким полем, тем самым обходя многие из воспринимаемых недостатков FISH-теста. Такие автоматизированные методы позволяют провести более быстрый скрининг образцов пациентов, чем ручные FISH-тесты. Результаты CISH можно сохранены, так как сигнал стабилен.

Дополнительной развивающейся технологией является двухцветная, двухгаптеновая, брайтфилдская гибридизация in situ (DDISH). DDISH обладает всеми преимуществами SISH (например, он полностью автоматизирован и поддается оценке с помощью обычной микроскопии), но с одним важным отличием. В отличие от SISH, которая требует двух отдельных слайдов для обнаружения HER2 и CEP17, DDISH использует двухцепочечные зонды, помеченные двумя гаптенами, чтобы обнаружить оба маркера на одном слайде. Несмотря на то, что в настоящее время данные ограничены, частота конкордации между, DDISH и FISH, по-видимому, высока

Согласно имеющимся данным можно сказать, что при надлежащем контроле существует минимальная разница между различными подходами ISH к определению амплификации гена HER2 (FISH, CISH, SISH или DDISH). Однако, хотя использование новых технологий тестирования становится все более распространенным явлением, существующие руководящие принципы ASCO/CAP (с 2007 года) преимущественно рекомендуют тестирование HER2 с помощью ИГХ или FISH. 

Продолжение статьи

• Часть 1. Статус HER2 при диагностике опухолей молочных желез. Характеристика.
• Часть 2. Статус HER2 при диагностике опухолей молочных желез. Иммуногистохимическое тестирование. Тесты ISH. 
• Часть 3. Ошибки при определении статуса HER2.