Этот методы исследования позволяют выявить заражение вирусом по его ДНК, определить тип возбудителя и вычислить микробную нагрузку. Их точность достигает 100%.
Методика проведения таких исследований примерно одинакова:
- После очистки поверхности шейки от влагалищных выделений, у женщины берется мазок с поверхности шейки и проходящего в ней цервикального канала. Для этого используется специальная одноразовая цитощетка со съёмной головкой, с помощью которой соскабливают небольшое количество эпителия.
- Съемная головка щетки вместе с попавшими на неё клетками кладётся в специальный раствор, в котором транспортируется в лабораторию.
- В лабораторных условиях извлекается ДНК вируса, которая затем обнаруживается с помощью различных реактивов. Существуют методы, позволяющие определить концентрацию вируса и его тип.
Содержание статьи
Лабораторные методы обнаружения ВПЧ можно схематически разделить на три группы
| Тип теста | Отличие | Пояснение |
| Неамплификационные | Генетический материал вируса обнаруживают только с помощью реактивов | Применяется редко, поскольку не дает возможность обнаружить возбудителя, находящегося в образце в небольшом количестве |
| Амплификация мишени – ПЦР-диагностика, ПЦР в реальном времени (реал-тайм) | Генетический материал вируса (мишень) выделяется, а затем многократно размножается – амплифицируется. Это дает возможность из небольшого количества генного материала получить достаточный объем для исследования.
Метод выявляет ВПЧ на ранних стадиях, когда возбудителя очень мало. Позволяет обнаружить тип вируса |
Методика не дает возможности узнать, вызвал ли папилломавирус какие-либо изменения на шейке матки. Поэтому исследование желательно сочетать с PAP-тестом и осмотром шейки ( кольпоскопией)
|
| Амплификация сигнала – Digene-тест (метод Digene
Hybrid Capture II, двойная генная ловушка) |
Усиливается (импфлицируется) световой сигнал, исходящий от подсвеченного возбудителя, который улавливается специальным прибором.
Метод подходит для диагностики ВПЧ на ранней стадии, поскольку «срабатывает» на небольшое количество вируса |
Методика основана на применении ИФА (иммуноферментного анализа). ДНК вирусов соединяются с антителами, затем эти соединения с помощью специальных реактивов заставляют светиться.
Метод не показывает степень поражения шейки матки, поэтому его желательно сочетать с PAP-тестом и осмотром шейки кольпоскопией |
ДНК-анализ методом ПЦР (амплификация мишени)
Биоматериал очищают и промывают, удаляя примеси. Процедуру проделывают несколько раз, пока не получится чистый образец.
Готовый чистый материал смешивают со специальным раствором, который разрушает вирус и высвобождает его генетический материал – ДНК. Количество генетического материала увеличивают (амплифицируют). Затем в подготовленный образец вносятся специальные реактивы, находящие ДНК вируса и вступающие с ним в реакцию. Полученные соединения показывают наличие возбудителя.
Реактивы, используемые для такого анализа, содержат сразу несколько компонентов, реагирующих на целый ряд папилломавирусов, что позволяет упростить и ускорить анализ. В разных лабораториях определяют различные типы возбудителя, но чаще всего диагностируют результаты анализов на штаммы ВПЧ 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44- 45, 51- 53, 56, 58-59, 66, 68, 73, 82. Но есть более простые варианты анализов, ограничивающиеся только обнаружением типов ВПЧ 16 и 18.
Хорошие результаты дает ПЦР-анализ «Квант-21», определяющий 21 штамм ВПЧ, из которых 18 относятся к высокому онкогенному риску.
Разновидность метода — ПЦР-реакция в реальном времени (реал-тайм). Это исследование позволяет не только выявить вирус, но и определить количественные показатели ВПЧ.
Для обработки ПЦР–анализов используется специальная программа, вычисляющая концентрацию вируса (вирусную нагрузку) в образце. Чем она выше, тем вероятней развитие рака шейки матки. В норме вирусная нагрузка составляет 103. геном-эквивалентов на 105 клеток эпителия. Превышение этого показателя указывает на повышенный риск дисплазии и рака или на их наличие.
Программное обеспечение, заложенное в диагностическую аппаратуру, фиксирует только концентрации, превышающие норму. Если содержание ВПЧ ниже, аппарат указывает результат, как отрицательный или клинически незначимый. Точность результат анализа ПЦР ВПЧ приближается к 100%.
Единичные ложноположительные и ложноотрицательные результаты вызваны, в основном, некачественным сбором материала и плохой подготовкой к обследованию. Чтобы этого избежать, перед взятием мазка за двое суток нужно отказаться от интимной близости, не спринцеваться и не вставлять в половые пути лекарства.
Определение ВПЧ методом амплификации сигнала
Эти исследования основаны не на увеличении количества ДНК вируса, а на усилении свечения, которое издают соединения, образующиеся в процессе диагностики.
Принцип обнаружения ВПЧ следующий. В ответ на попадание в организм любого чужеродного вещества (антигена), в том числе папилломавируса, образуются антитела, которые находят возбудителя и соединяются с ним. Эта защитная реакция позволяет клеткам иммунной системы найти “помеченные” вирусы, чтобы уничтожить их.
При проведении анализа используются искусственные антитела, изготовленные из крови животных или синтезированные вещества, реагирующие на ВПЧ. Антитела, соединившиеся с возбудителем, заставляют светиться с помощью специальных иммунофлюоресцентных веществ. Затем это свечение усиливают и регистрируют.
Для проведения анализа, материал, полученный с поверхности шейки и цервикального канала, смешивают с раствором, вызывающим разрушение вирусов и освобождение из них ДНК.
В смесь, содержащую генный материал, добавляют антитела. Количество биологического материала при этом не увеличивают, как при ПЦР анализе. Получают комплексы-антиген-антитело, называемые гибридами. Гибриды отделяют и соединяют с веществами, вызывающими их свечение. Затем с помощью химических реакций и специальной аппаратуры свечение многократно усиливают и улавливают прибором-люминометром.
Методика выявляет 13 высокоонкогенных типов ВПЧ и определяет вирусную нагрузку. Согласно стандартам, нижним порогом является 100000 генокопий/мл или 1 пг/мл. Если вирусов обнаружено меньше, аппарат выдаст заключение об их отсутствии, хотя ВПЧ могут находиться в организме в минимальных количествах.
- Интерпретация результата анализов ВПЧ: расшифровка цитологии и гистологии
- Расшифровка анализа на ВПЧ: подробная интерпретация цитологического и гистологического анализов
- Расшифровка анализа на ВПЧ: интерпретация результатов анализов. Постановка диагноза
Для отправки комментария необходимо войти на сайт.