Количественный анализ на ВПЧ

Количественный анализ на ВПЧ (вирус папилломы человека, папилломавирус) позволяет выявить концентрацию этого возбудителя. Папилломавирусная инфекция вызывает рак и предрак шейки матки, мочевого пузыря, наружных половых органов у мужчин и женщин. Инфицирование приводит к появлению предраковых состояний – дисплазий, генитальных бородавок – кондилом, висячих родинок – папиллом и других поражений кожи и слизистых.

Зачем проводится количественный анализ на ВПЧ

Папилломавирусы воздействуют на клетки, провоцируя онкологию. В этом и кроется их основная опасность.

Всего обнаружено более 170 видов (штаммов) возбудителя, каждый из которых имеет свой номер. Микроорганизмы обладают различной способностью вызывать рак (онкогенностью), которая может быть высокой, средней и низкой. Есть не до конца изученные разновидности, опасность которых пока не ясна. Их со временем отнесут к одной из категорий.

Существует классификация вирусных типов, которая постоянно обновляется и уточняется по мере изучения возбудителей и открытия новых штаммов.

Самыми онкогенными считаются штаммы 16 и 18, на которые приходится до 90% раковых опухолей. Но типы, не относящиеся к высокоонкогенным, тоже могут стать причиной онкологии, правда, в более редких случаях. Эти микроорганизмы вызывают бородавки, папилломы, кожные заболевания, поэтому считать их безобидными не стоит.

 Классификация ВПЧ по типу онкогенности, согласно исследованиям 1991-1992, 2002, 2003, 2006 г.

Все эти возбудители опасны только в больших в концентрациях — в остальных случаях они не оказывают значительного воздействия на клетки и не вызывают онкологию. Поэтому важно определить не только наличие инфицирования, но и уровень заражения. Для этого проводится количественный анализ на ВПЧ. Он, как и качественное исследование, показывает тип возбудителя, а соответственно, и риск развития рака.

Показания для выполнения количественного анализа на ВПЧ

• Скрининг шейки матки — исследование, которое периодически рекомендуется проходить всем женщинам для выявления раковых и предраковых патологий. Помимо анализа на ВПЧ, в него входят кольпоскопия – осмотр шейки матки при помощи прибора-кольпоскопа, и взятие мазка по Папаниколау на злокачественные и предраковые клетки.
• Патологические изменения на поверхности шейки матки, которые, возможно, вызваны папилломавирусом.
• Плохие результаты мазков с шейки матки по Папаниколау. При наличии вирусного заражения в них обнаруживаются изменённые (атипичные клетки), имеющие неправильную форму, строение и размер. Связать клеточные изменения с папилломавирусной инфекцией можно с помощью лабораторной диагностики.
• Предраковые поражения мочевого пузыря.
• Кожные проявления в аногенитальной области, подозрительные на заражение папилломавирусной инфекцией.
• Мониторинг лечения. Исследование проводится, чтобы оценить эффективность применяемых лечебных методов, направленных на устранение этого возбудителя.

Для исследования берутся мазки (соскобы) с различных областей урогенитального тракта. Диагностика безболезненна, безвредна, безопасна и не вызывает осложнений.

Подготовка к взятию материала для количественного анализа на ВПЧ

• В течение суток перед посещением клиники нужно отказаться от введения в половые пути любых препаратов и проведения спринцеваний.
• В течение двух суток до сдачи материала нельзя жить половой жизнью.
• Если в день взятия соскобов нужно пройти трансвагинальное УЗИ малого таза с ведением датчика во влагалище, сначала берется материал для исследования, а потом проводится ультразвуковая диагностика.
• Женщин не обследуют во время менструации, после родов и абортов. В образцы попадет кровь, и результат исследования исказиться.
• Перед посещением врача нежелательно мыть половые органы средствами, содержащими антисептические препараты.
• Перед взятием мазка из уретры нельзя мочиться, чтобы урина не смыла микроорганизмы.

Как берётся материал для качественного анализа на ВПЧ

Для исследования берутся соскобы:

• со слизистой шейки матки;
• из цервикального канала, соединяющего шейку матки и влагалище;
• из заднего свода влагалища, находящегося под шейкой;
• из уретры — мочеиспускательного канала. Такие соскобы берут у мужчин и женщин.

В Университетской клинике используется передовой жидкостной метод количественной оценки ВПЧ, при котором полученные образцы транспортируются в специальной жидкости. Жидкостная методика позволяет избежать пересушивания соскобов и дает возможность исследовать максимальное количество материала.

У женщин для взятия материала во влагалище вводится медицинское зеркало, позволяющее получить доступ к шейке матки. Проводится осмотр эпителия, покрывающего шейку, а затем с помощью тампона врач убирает слизь и выделения, которые могут загрязнить образец.

После этого берется материал для исследования:

• С поверхности шейки матки (зктоцервикса). Соскоб берут при помощи цервикальной щётки (цитощетки), представляющей собой пластиковое устройство с жесткими щетинками. После взятия материала ее съемная головка отделяется и помещается в пробирку с раствором для транспортировки. Образец маркируется буквой «С».
• Из цервикального канала. Образец также берется с помощью цитощетки. Обязательно исследуется зона трансформации, находящаяся возле выхода из цервикального канала. Так называется место соединения эпителия, покрывающего шейку матки снаружи и находящегося внутри шейки. Именно здесь чаще всего образуются раковые опухоли, вызванные воздействием папилломавируса. Образец маркируется буквой «Е».
• Из нижнего свода влагалища. Биоматериал берётся с помощью мягкого зонда-тампона или комбинированного зонда. С помощью вращательных движений врач забирает достаточное количество слизи, затем рабочую часть устройства отделяют и помещают в раствор для транспортировки. Образец маркируется буквой «V».
• Материал из уретры. Берётся с помощью тонкого зонда. Образец маркируется буквой «U. У мужчин такой соскоб берут на кушетке, а у женщин — на гинекологическом кресле.

Врач может назначить не все варианты исследований. Всё зависит от области поражения, симптомов болезни и пола пациента. У женщин чаще всего берутся образцы с шейки матки из цервикального канала, а у мужчин — из уретры.

Полученные образцы отправляют в лабораторию. Каждая взятая порция материала исследуется отдельно.

Как проводится анализ на ВПЧ (количественный)

Образцы, переданные в лабораторию, промывают, чтобы очистить от примесей. Затем проводится реакция амплификации (усиления, увеличения). При ее проведении частички генетического материала – ДНК ВПЧ многократно копируются (реплицируются), соединяясь с реактивами. Такая методика проведения анализа называется ПЦР – полимеразной цепной реакцией.

Полученные соединения обладают эффектом свечения – флуоресценции, который регистрируется специальным прибором. Количественное исследование основано на зависимости вирусной концентрации от интенсивности флюоресценции. Чем раньше и интенсивнее начнёт светиться образец, тем выше содержание возбудителя.

Все применяемые реактивы, реагируют на определенные типы вируса, поэтому выявляют только определенные штаммы, например, ВПЧ 16 и 18. Существует несколько вариантов такого анализа, обнаруживающих различные разновидности папилломавируса. Выявление типа микроорганизма, проводимое при количественном исследовании, называется типированием.

Полученные результаты обрабатываются с помощью компьютера. Программа определяет абсолютные и относительные показатели содержания возбудителей.

В большинстве лабораторий минимальный уровень заражения не берется во внимание. Если микроорганизмов меньше 100000 генокопий/мл или 1 пг/мл, результат считается отрицательным. Столь малое количество папилломавирусов не может вызвать рак и другие заболевания.